Synthèse peptidique

Le service de synthèse peptidique réalise des peptides par voies chimiques via un synthétiseur automatique de peptide. Nous disposons de deux synthétiseurs, l’Applied Biosystems A 433 et le Liberty Blue (CEM corporation). Les peptides sont purifiés par HPLC en phase inverse.

L’ingénieur en charge du service commence par établir un devis en fonction de la séquence, des modifications éventuelles et de la quantité de peptide à produire. Une fois obtenu l’accord de l’utilisateur, il réalise la synthétise et la purification du ou des peptides. Les peptides sont fournis sous forme de poudre à 95% pure. Un spectre de masse et un profile HPLC en phase inverse sont fournis pour chaque peptide

Equipements

  • A 433 (Applied Biosystems)

Synthétiseur automatique de peptide en phase solide A 433 d’Applied Biosystems. Il est capable de fonctionner en stratégie Fmoc et Boc. On peut produire de 0,1 à 1 mmol de peptide.

  • Liberty Blue

Synthétiseur automatique de peptide en phase solide Liberty Blue de CEM corporation. Cet appareil de dernière génération est capable d’utiliser les micro-ondes à toutes les étapes de synthèses. Il présente des temps de réactions très courts, seulement 4 minutes par cycle. Il ne fonctionne qu’en stratégie Fmoc. Bien qu’il ne réalise qu’un peptide à la fois on peut programmer jusqu’à 24 synthèses à la suite avec l’ajout de 2 modules optionnels. On peut produire de 0,025 à 5 mmol.

  • HPLC Goebel de BioServ

Chaîne HPLC Goebel de BioServ avec différentes colonnes semi-préparatives et analytiques, en phase inverse, pour purifier les peptides et les protéines

  • Lyophilisateur

Cet appareil réalise une sublimation, à l’aide d’un vide poussé, des liquides et permet d’obtenir des composés sous forme de poudre, beaucoup plus stable qu’en solution

Prestations

  • Délais de 2 à 4 semaines par peptide.
  • Quantité de peptide fournie : de 1 à 100 mg.
  • Pour des quantités > 100 mg, sur devis.
  • Nombreuses modifications possibles.
  • Le degré de pureté du peptide fourni est à 95%.
  • Un spectre de masse et un profile HPLC en phase inverse sont fournis avec le peptide.
  • Peptide fourni lyophilisé.

Contrôle qualité des peptides :

  •  Le spectre réalisé en Maldi-Tof vérifie l'intégrité du peptide.
  • Le profile HPLC en phase inverse illustre la pureté du peptide.
  • Les peptides sont lyophilisés et la quantité pesée est stockée à -20°C.

Méthodologie

Méthode de synthèse :

  • La synthèse est réalisée à l’aide du synthétiseur de peptides Applied Biosystems 433A ou du synthétiseur à micro-ondes Liberty Blue (CEM Corporation).
  • Les peptides sont synthétisés sur un support solide (résine de polystyrène) en allant de l'extrémité C-terminale vers l'extrémité N-terminale et en utilisant une chimie Fmoc.
  • La synthèse est réalisée avec des échelles de 0,025 à 5 mmol

Purification :

  • Le peptide synthétique brut contenant des impuretés (peptides avec une ou plusieurs délétions de résidus d’acide aminé, produits chimiques) est purifié par chromatographie semi-préparative en phase inverse (colonnes C4 à C18).
  • Après analyse HPLC de cet échantillon brut et mise au point des conditions optimales de séparation, les différents pics sont collectés et le spectre de masse est déterminé afin d’identifier le pic correspondant au peptide de masse moléculaire attendu.
  • Le peptide d’intérêt identifié est ensuite totalement purifié, lyophilisé, pesé et finalement analysé par HPLC analytique en phase inverse afin de vérifier sa bonne pureté.
  • L’intégrité du peptide est déterminée en analysant son spectre de masse.